引言

葛根(Pueraria）别名黄斤，是野葛的根，属于一种中药材，具有升阳、止泻、退热、生津、抗肿瘤、抗氧化等功效^[1]，还可治疗高血压、头疼脑热等疾病，具有很高的药用价值。葛根在全国各地均分布广泛，主要分布在湖北、辽宁、河南、四川等地^[2]。

葛根中含有黄酮等活性物质，葛根黄酮的含量大约在葛根总量中占12%^[3]。葛根黄酮具有抗氧化、抗病毒、降血糖等作用^[4]，还可治疗心脑血管疾病，如三高等^[5]，且可作保健品使用，用于醒酒等领域。

中国每年产大量葛根，国内生产葛根的企业很多，但大部分都是在使用葛根里含有的淀粉，无视葛根中的黄酮^[6]。这样的做法造成了资源的浪费。目前关于葛根黄酮的研究相对较少，产品开发和利用还处在初期阶段，做好葛根的深处理工作，可满足人们开发功能性食品、保健品、营养辅助品等产品的需要^[7]。如能充分利用中国丰富的葛根资源，开发更多葛根黄酮类药品和食物，对经济发展可有重大的推进作用^[8]。

目前文献报道提取黄酮的方法有很多。例如王婷、陈港等人，采用超声波辅助正交试验进而得出黄芪总黄酮的提取率^[5]；周正元、程昊等人，运用乙醇溶液提取百香果叶中的总黄酮等^[6]；刘特津、钟希文等人，采用紫外分光光度法测定水松叶的总黄酮含量^[7]等。

借鉴前者的经验，本文采用乙醇回流提取技术用作提取葛根黄酮的方法，利用单因素实验和正交实验，对葛根中黄酮的提取进行条件优化。

1  材料与方法

1.1材料

干燥的葛根（中国辽宁）

1.2方法

1.2.1葛根黄酮的提取及检测

取一些葛根，用矿泉水冲洗干净后，放进干燥器里烘干60分钟。烘干后的葛根捣碎磨粉。取一定量的葛根粉末，在不同实验条件下回流提取，提取液由真空泵抽出，使固液完全分离后。用移液枪吸取提取液1mL置于10mL的刻度试管中，加入5%亚硝酸钠溶液0.3mL、10%硝酸铝溶液0.3mL，保持六分钟；再加入4mL 4%氢氧化钠溶液，保持10分钟；最后以蒸馏水定容至10mL。以上溶液测定510nm处吸光度，并计算葛根黄酮的提取率。

1.2.2芦丁标准曲线测定

制作标准液：芦丁0.1g，95%乙醇溶解定容至100mL，再用水定容到1000mL。

分别吸取0、1mL、2mL、3mL、4mL、5mL芦丁标准液到在6个10mL刻度试管中。

在试管中各自加入0.3mL 5%亚硝酸钠溶液静置6min，加入0.3mL 10%硝酸铝溶液静置6min，加入4mL 4%氢氧化钠溶液，保持15min，最后用蒸馏水定容至10mL。

在510nm处测吸值，绘制芦丁标准曲线。

1.2.3葛根黄酮提取率的公式

式中：

C——回归方程中黄酮的质量浓度（mg/mL）

V——提取液体积（mL）

M——样品质量（g）

1.2.4单因素试验

1.2.4.1不同回流时间对葛根黄酮提取率的影响

称取6.25g葛根粉，料液比1:40（g/mL）、乙醇体积分数70%的条件下，定容至250mL容量瓶中。取5份各25mL上述溶液，回流温度为70℃条件下，分别回流80min、100min、120min、140min、160min。回流液按1.2.1的方法进行检测，并计算得到的黄酮的提取率。以此考察不同回流时间对葛根黄酮提取率的影响。

1.2.4.2不同温度对葛根黄酮提取率的影响

称取6.25g葛根粉，料液比1:40（g/mL）、乙醇体积分数70%的条件下，定容至250mL容量瓶中。取5份各25mL上述溶液，分别在温度70℃、75℃、80、85℃、90℃的条件下回流提取，提取时间为120min。回流液按1.2.1的方法进行检测，并计算得到的黄酮的提取率。以此考察不同回流温度对葛根黄酮提取率的影响。

1.2.4.3不同乙醇体积分数对葛根黄酮提取率的影响

称取5份各6.25g葛根粉，料液比1:40（g/mL）的条件下，乙醇体积分数分别为60%、65%、70%、75%、80%定容至250mL容量瓶中。取上述5种样品各25mL，在回流时间120 min，回流温度70℃进行回流提取。回流液按1.2.1的方法进行检测，并计算得到的黄酮的提取率。以此考察不同乙醇体积分数对葛根黄酮提取率的影响。

1.2.4.4不同料液比对葛根黄酮提取率的影响

分别称取25g、12.5g、8.3g、6.25g、5g的葛根粉，料液比1:40（g/mL）、乙醇体积分数70%的条件下，定容至250mL容量瓶中。取上述5种样品各25mL，在回流时间120 min，回流温度70℃进行回流提取。回流液按1.2.1的方法进行检测，并计算得到的黄酮的提取率。以此考察不同料液比对葛根黄酮提取率的影响。

1.2.5葛根黄酮提取的正交试验设计

为探索葛根黄酮的最佳提取条件，选择以下4个因素进行考察，采用L9（34）正交设计回流提取条件，依据上述各个实验的结果，选择一定的水平做正交试验，遵照L9（34）的正交试验表进行实验设计。

表1正交试验因素水平设计表

2  结果与讨论

2.1芦丁标准曲线

根据1.3.2的实验方法绘制芦丁标准曲线，所得如图1所示如。

图1 芦丁标准曲线图

由图1可知，芦丁标准曲线的R2=0.9936，可以看出回归直线对实测值的吻合较好，具有较好的可靠性。

2.2单因素试验结果

根据1.2.4的实验方法，所得结果为最佳回流时间120min，最佳回流温度为80℃，最佳乙醇体积分数为70%，最优的料液比为1:40。

2.3正交试验的结果

通过单因素试验筛选出三个最佳水平，结果见下表。

表2正交试验的结果与直观分析表

表3正交试验的方差分析表

在单因素试验的基础上，采用正交试验设计优化实验。

根据表2可知，试验6葛根黄酮提取率最佳。由此确定，葛根黄酮最佳提取条件：提取温度85℃，乙醇体积分数65%，提取时间120 min，料液比1：40。影响因素大小B>A>C>D，葛根黄酮的提取率为1.56%。

本文由芦丁标准曲线为对照，乙醇回流提取法为试验方法，采用单因素试验考察提取物不同料液比、不同提取时间、不同乙醇体积分数和不同提取温度对葛根中黄酮提取率的影响。得出的实验结论：料液比1：40，乙醇的体积分数70%，提取时间120min，回流温度80℃。根据上述结果，分别选取三个条件进行正交试验，得出最佳条件是：提取温度85℃，乙醇的体积分数65%，提取时间120 min，料液比1：40，葛根黄酮的提取率为1.56%。

参考文献：

[1]韦金娜,朱宝生,龙琳,黄靖洲,谢承孟.葛根加工现状及其在饮料开发中的综合利用[J].保鲜与加工,2021,21(03):136-140.

[2]聂晓霞,王翠香.葛根素提取物改善妊娠期糖尿病大鼠的氧化应激损伤[J].现代食品科技,2021,37(02):44-48,63.

[3]王雪,乔博,张健鑫,李冬雪,刘艳琴,石旭柳.黄酮类化合物的应用研究进展[J].中国食品添加剂,2020,31(04):159-163.

[4]莫婵,覃晓霞,谢明秋,等.壮药山风总黄酮提取工艺的优化研究[J].中国野生植物资源,2020,39(01):18-22.

[5]王婷,陈港,赵宝娥,等.正交试验设计优化黄芪总黄酮提取工艺[J].农业科技与信息,2019(22):36-39.

[6]周正元,程昊,唐婷范,等.百香果叶总黄酮提取工艺优化[J].广西科技大学学报,2019,30(03):115-119.

[7]刘特津,钟希文,张文霞,等.正交试验法优化水松叶中总黄酮的提取工艺研究[J].中国合理用药探索,2017,14(01):4-7.

[8]冯利,任燕飞,胡鸢雷.基于社会网络分析的葛根产品现状分析[J].世界科学技术-中医药现代化,2020,22(04):1185-1192.

作者简介：

董悦涵（1980.11-），女，汉族，浙江丽水人，硕士，副教授，研究方向：微生物与生化药学。